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血清在使用时容易碰到那些问题,该如何解决
点击次数:28 发布时间:2018-11-24
  血清在使用时容易碰到那些问题,该如何解决
  想要让科技有更大的进步就需要不断的做实验,这样才会有进展。而血清是实验中常用到的材料,但是不能让血清受到任何不好的影响,不然就会对实验造成不小的影响,让实验数据不准确。那血清在使用时容易碰到那些问题,该如何解决?
  1•●、如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?
  将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。
  长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素•●、纤维蛋白原•●、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。
  我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
  2•●、血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?
  沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失
  4•●、如何避免血清中产生沉淀?
  按如下操作可避免沉淀的产生:
  (1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
  (2)血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。
  (3)勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
  (4)勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。
  (5)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
  (6)若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
  5•●、培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?
  一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
  6•●、为什么要热灭活血清?
  加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞•●、平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
  7•●、有必要做热灭活吗?
  实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
  若非必须,可以不需要做热处理这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!
  8•●、细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?
  一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄•●、变混浊。污染包括细菌污染•●、支原体污染等。
  如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:
  (1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;
  (2)血清质量不好,反复冻融的结果;
  (3)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;
  (4)配制培养基的水质•●、容器不合格?捎τ美胄•●、过滤的方法去除这些黑点;
  (5)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。
  9•●、细胞培养中如何防止黑点生成?
  (1)尽可能地减少血清冻融次数。
  (2)培养基无需37℃水浴。
  (3)培养基保持佳PH值7.0-7.2。
  (4)严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。
  (5)掌握细胞传代的佳时机,细胞切勿生长过老。
  10•●、小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项?
  来源不同:胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calfserum,CS)采自出生10至14天的小牛。
  组份与比例不同:两者所含的促细胞生长因子•●、促贴附因子•●、激素及其他活性物质等组份与比例不同,用途与用法不同:某些细胞必需胎牛血清才能生长,而有些细胞只需小牛血清即可,使用浓度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。
  血清保存和使用须注意:血清应保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时,应先将血清至于2-8℃冰箱,并经常摇匀使之溶解,然后至室温放置使之升温,绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中,如放在37℃解冻,颜色加深,粘稠度也会增加,血清在解冻和热灭活后,应按用量分装并于-20℃保存,避免反复冻融。
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