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烟酰胺腺嘌呤双核苷酸的生产方法
点击次数:23 发布时间:2018-11-29

       烟酰胺腺嘌呤二核苷酸是一种转递質子(更准确来说是氢离子)的辅酶,它出现在细胞很多代谢反应中。NADH或更准确NADH + H+是它的还原形式。它可以被还原,最多携带两个質子(写为NADH + H+)。NAD+是脱氢酶的辅酶,如乙醇脱氢酶(ADH),用于氧化乙醇。它在糖酵解•●、糖异生•●、三羧酸循环及呼吸链中发挥着不可替代的作用。中间产物会将脱下的氢递给NAD,使之成为NADH + H+。而NADH + H+则会作为氢的载体,在呼吸链中通过化学渗透偶联的方式,合成ATP。 在吸光方面,NADH+H+在260nm和340nm处各有一吸收峰,而NAD+则只有260nm一处吸收峰,这是区别两者的重要属性。这同时也是很多代谢试验中,测量代谢率的物理依据。NAD在260nm的吸光系数为1.78*104L /(mol*cm),而NADH在340nm的吸光系数为6.2*10? L/(mol*cm)。

生产方法:
1.从鲜酵母提取,步骤如下:新鲜压榨酵母[破壁,提取]提取液[分离]滤液[一次吸附][洗脱]一次洗脱液[中和][二次吸附][洗脱][三次吸附][洗脱]三次洗脱液[沉淀][过滤][干燥]辅酶I
2.以酵母为原料
破壁•●、提取•●、分离 将新鲜压榨酵母搅拌下加入等量的沸水,加热至95℃保温5min,迅速加入两倍酵母质量的冰块,过滤,滤饼用水洗涤2次,合并滤液和洗液,加入强碱性季铵I型阴离子交换树脂201×7(717),搅拌16h,过滤,收集滤液。
新鲜压榨酵母[沸水•●、冰块]→提取液[201×7树脂]→滤液
吸附•●、洗脱 滤液用浓盐酸调pH=2-2.5,经弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂122柱吸附,用无热原水洗至流出液澄清为止,再用0.3mol/L氢氧化铵溶液洗脱,当流出液呈淡咖啡色,经340nm分光光度计测定吸光度大于0.05时,开始收集,流出液呈淡黄色时停止,得洗脱液。
滤液[pH2-2.5]→吸附物→洗脱液
中和•●、吸附 将强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂001×7(732)加至洗脱液中,搅拌测pH=5-7,过滤,滤饼用无热原水洗涤,合并洗液和滤液,加稀氨水调pH值至7(约15%),再用强碱性季铵I型阴离子交换树脂201×7 (717)50-60目柱进行吸附,用无热原水洗至流出液澄清无色为止。
洗脱液[001×7树脂,氨水,201×7树脂]→[pH7]吸附物
洗脱•●、吸附•●、洗脱 将766型活性炭60-80目柱与201×7树脂柱串联,用0.1mol/L氯hua钾溶液洗脱,洗脱液立即流经活性炭柱进行吸附,吸附完后解除两柱串联,用pH9的无热原水洗涤,再用pH8的4%乙醇洗涤,最后用无热原水洗至中性,用体积比为丙酮:乙酸乙酯:水:浓氨水=4:1:5:0.02的混合液洗脱,当洗脱液加3倍丙酮产生白色浑浊时,收集洗脱液。
吸附物[201×7树脂柱,氯hua钾,766型活性炭]→洗脱液[活性炭柱]吸附物[无热原水,乙醇]→[洗至中性]吸附物[丙酮,乙酸乙酯,水,浓氨水]→洗脱液
沉淀•●、干燥 洗脱液在搅拌下加30%-40%硝酸调pH=2-2.5,过滤,冰库过夜,过滤,95%的冷丙酮洗涤,真空干燥,得成品。
洗脱液[硝酸]→[pH2-2.5, 0℃]沉淀[丙酮]→[干燥]C0I成品。

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