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培养基生产和使用常见问题
点击次数:27 发布时间:2019-04-11

     培养基,是指供给微生物•●、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物•●、含氮物质•●、无机盐(包括微量元素)•●、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。培养基种类很多,根据配制原料的来源可分为自然培养基•●、合成培养基•●、半合成培养基;根据物理状态可分为固体培养基•●、液体培养基•●、半固体培养基;根据培养功能可分为基础培养基•●、选择培养基•●、加富培养基•●、鉴别培养基等;根据使用范围可分为细菌培养基•●、放线菌培养基•●、酵母菌培养基•●、真菌培养基等。培养基配成后一般需测试并调节pH,还须进行灭菌,通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质,易被污染或变质。配好后不宜久置,最hao现配现用。

1. 低血清培养基能用肉眼判断其pH值吗?

答:低血清培养基中酚红的含量与普通培养基中的酚红含量不同,不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值,建议使用pH计进行测定。

2. 低血清培养基的缓冲系统是什么?

答:平衡盐一般是由无机盐及葡萄糖组成的。平衡盐有Hanks′系统•●、Earle′s系统•●、Dulbecco′s磷酸缓冲盐系统等。199系列培养基•●、MEM系列培养基均有Hanks′系统的培养基及Earle′s系统的培养基。但是有些培养基均不是以上常规的平衡盐系统,例如RPMI 1640培养基•●、F12培养基。MEM(SLM)低血清培养基的平衡盐系统也不是常规的平衡盐系统,该平衡盐系统的缓冲能力强于常规平衡盐系统的缓冲能力。

3. 谷氨酰胺溶液和碳酸氢钠的配制方法是什么?

答:以0.2mol/L的 L-谷氨酰胺配制为例:称取L-谷氨酰胺2.92g,加注射用水100ml,充分搅拌混匀。用0.2μm滤膜正压过滤除菌。溶液应在4℃下避光保存,2周内使用。

以7.5% NaHCO3的配制为例:称取NaHCO37.5g溶于100ml蒸馏水中过滤除菌。

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4. 什么培养基中可以省去加酚红?

答:酚红在培养基中用作pH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。酚红本身对生物制品质量并不会产生影响,可以通过纯化技术去除,但酚红在无血清培养基可能带来胞内钠/钾失衡,影响细胞生长,当然这种作用能被血清所中和或减轻。 酚红并不是培养基中必需的一种成分,很多国外的疫苗或抗体生产企业在生产过程中都使用无酚红培养基。

5. 放置在冰箱中的培养基颜色会发生变化,为什么?

答:培养基保存于4℃冰箱中,培养基内CO2 会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。而培养基中酸碱指示剂(通常为phenol red)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱后再用于细胞培养将造成细胞生长停滞或死亡。培养基偏碱时,可以通入无菌过滤的CO2,以调整pH值。

6. 无血清培养与有血清培养使用的抗生素量一样吗?

答:当在无血清培养基中添加抗生素时,降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。因为血清中的蛋白会结合和灭活一些抗生素。而在无血清培养条件下,抗生素不被灭活。

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