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免疫组化中抗体的选择要求!!
点击次数:83 发布时间:2019-04-30

1•●、一抗选择要点
(1)选择单克隆还是多克隆抗体。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体,单克隆抗体能目标明确地与单一特异抗原决定簇结合。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对较低;而多克隆抗体特异性稍弱,抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等有所避免)。

(2)种属来源。一般家兔来源的抗体多是多克。欢∈罄丛吹目固宥嗍堑タ寺,但也有另外。这条主要要与后面的二抗来源相匹配。

(3)实验目的是检测什么种属的抗原,即species reactivity。这一点很重要,一般说明书上都有注明,如小鼠Ms•●、大鼠Rat•●、人Hum等等。

(4)能否做免疫组化。一般一抗说明书都会注明做WB•●、IHC•●、ICC•●、IF等,建议zui好选择注明的抗体,因为一般都是经过文章证明。

(5)检测标本类型。用于检测石蜡切片还是冰冻切片,一般能做石蜡切片的抗体,可能都可以用来检测冰冻切片,但能做冰冻切片的抗体,不一定能检测石蜡切片中的抗原。

(6)生产厂家。国外抗体生产商原装抗体质量一般没问题,但有点贵;而国内分装厂家用的一抗工作液,价格便宜,但有时结果的稳定性和重复性稍差,尤其不同批次重复性较差。

(7)价格与质量的矛盾。一抗原装质量可能会好点,因为许多一抗避免反复冻融,且在稀释液中稳定性较差(若时间长),但价格较贵。


2•●、二抗选择要点

(1)种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊•●、兔等均可)。

(2)标记物的选择。有HRP•●、Biotin•●、荧光素等标记物。一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗,以与后面的SP结合反应;而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗,如罗丹明•●、FITC•●、Cy3等常用荧光素。这主要与后面有无三抗和三抗种类有关。

(3)选择IgM还是IgG。一般一抗是IgM,那么二抗就选择IgM;反之,一抗是IgG,则二抗选择IgG。

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