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这么牛的技术对抗体有什么要求吗?
点击次数:223 发布时间:2018-12-14

年初《Nature》杂志展望 2018 年生物医学技术突破,作为「technology to watch in 2018」——质谱流式细胞技术(CyTOF),很多国内外大咖已经聚焦这项技术。质谱流式技术(CyTOF)可以对数百万细胞进行超过 40 个参数的单细胞分析,让研究更加全面•●、深入。
 

质谱流式

与传统流式技术相比,质谱流式采用非放射性的稳定重金属同位素作为抗体的标签,达到同时测量单细胞中多个靶点的目标,高纯度金属同位素确保了低的背景以及小的信号重叠。

 

质谱流式原理

 

质谱流式技术需要用到金属偶联标记的抗体?固逯柿,尤其是特异性是后续实验成功的关键。使用经过严格标准验证的抗体,能大大提高实验成功率。


质谱免疫组化

 

基于 CyTOF 技术,质谱流式成像技术 Imaging Mass Cytometry™ 将质谱流式(CyTOF)超高检测通道数量的优势在组织成像研究中大化,其性能远远超越了传统的免疫组化或者免疫荧光技术。目前通过单次扫描即可获得组织切片样本上 4-37 种蛋白标记物的图像数据,准确反映了蛋白及对应的细胞在组织微环境中的表型和相互关系等多方面综合全面的信息,特别是针对一些珍贵的 FFPE 样本或冰冻组织切片,可以在亚细胞水平进行更深入的分析。


 

1•●、这么牛的技术对抗体有什么要求吗?

一般而言,常规的一抗,储存液中都包含BSA•●、甘油•●、等可能会干扰部分偶联标记化学反应的成分。这些干扰成分在常规的无需对抗体进行改造的实验中能提高抗体的稳定性•●、降低移液损失和冰冻造成的效价降低。但是在抗体偶联标记类实验(包含金属标记反应)中可能会造成标记效率降低的问题。所以,CyTOF 需要无载体缓冲液的抗体形式,不包含 BSA•●、甘油•●、叠氮钠等可能干扰重金属标记反应的抗体缓冲液。

 

2•●、CST 是否可以提供 CyTOF 定制抗体?

CST 可以提供这种定制形式的抗体可直接储存在 PBS 缓冲液中,并且可以定制成更高抗体浓度(部分可能以 >1 mg/ml 浓度提供)的产品,便于后续进行偶联标记反应。

 

3•●、如何提高 CST 的抗体做 CyTOF 的成功率?

虽然目前质谱流式技术不在 CST 标准内部应用验证流程中,如果您遵循以下建议,很有可能提高该实验的成功率。

 

若采用 Helios™ 平台进行实验,可优先考虑从 CST 的 Flow 验证过的抗体目录中进行选择。

 

若采用 Imaging Mass Cytometry™ 平台,您选择的抗体应与样品制备方法相匹配。对于石蜡切片样品,可优先考虑从 CST 的 IHC-P 或 IF-P 应用验证的抗体目录中进行选择。对于冷冻组织切片,可优先考虑从 CST 的 IF-F 或 IHC-F 应用验证的抗体目录中进行选择。

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